Phos-tag SDS-PAGE データ集 tau

Tau (His-tag, Human, Recombinant)

Non-glycosylated and non-phosphorylated form of the 441 amino acidTau splice variant. Tau is thought to promote normal microtubuleassembly and stabilize microtubules in vivo. Hyperphosphorylated andglycated Tau tends to self-assemble and form paired helical filaments(PHFs), which are the basic structural components of neurofibrillarytangles (NFTs). NFT accumulation correlates with the clinicalprogression of Alzheimer’s Disease.
Mw: 60,000

泳動結果

3種類のチロシンキナーゼ　Abl, MET, FYNによる，Tau の in vitro kinase assayです。

Tau タンパク質には5つのチロシンTyr-18, -29, -197, -310, -394があります。
Abl はTyr-394
METはTyr-197
FYNはTyr-18
をリン酸化します。

Zn²⁺–Phos-tag SDS-PAGE で，Abl，MET, FYNによってリン酸化されたものが
それぞれ，異る移動度でシフトアップしています。
（各パネルは，反応前（左）と反応後（右）の２レーンの対比です）

抗リン酸化チロシン抗体(PY20)によるWB は，
シフトアップしたバンドがチロシンリン酸化物であることを証明しています。

Mn²⁺–Phos-tag SDS-PAGE で，Abl，MET によってリン酸化されたものが
シフトアップしていますが，FYNはシフトアップバンドが見られません。

Mn²⁺–Phos-tag SDS-PAGE ではリン酸化していてもシフトアップしない例があるが
Zn²⁺–Phos-tag SDS-PAGEはそのそのようなリン酸化タンパク質でも
シフトアップバンドとして検出できました。

一般に，Mn²⁺–Phos-tag SDS-PAGEよりも，
Zn²⁺–Phos-tag SDS-PAGEを用いたほうがリン酸化タンパク質の分離度が高いのですが
Zn²⁺–で分離検出できなくてもMn²⁺–で出来るケースもあるので
一概にどちらを選択するべきかは決められず，
ケースバイケースで検討するのが望ましいです。

また，この実験は
Phos-tag SDS-PAGE では分子内のリン酸化数が同じでも
リン酸化部位が異なれば，異なる移動度を示す
ということも示しています。

Tau (His-tag, Human, Recombinant)

泳動結果

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